應用慢病毒shRNA文庫結合二代測序篩選白血病細胞系增殖相關lncRNA
【摘要】:長鏈非編碼RNA (lncRNA) 是包括細胞增殖在內的許多細胞過程的重要調節因子。雖然已有研究表明多種lncRNA在造血系統惡性腫瘤的發生發展過程中發揮重要作用,但是缺少一個更全面和無偏倚的方法同時研究多個lncRNA中對白血病細胞系產生功能性影響的lncRNA。在此,我們利用短發夾RNA (shRNA) 文庫結合高通量測序的方法,篩選對白血病細胞系增殖有影響的lncRNA,確定了74個候選lncRNAs。從中選取lncRNA C20orf204-203作為驗證研究對象,發現C20orf204-203在K562和THP-1細胞系中均定位于胞質,敲降C20orf204-203的K562和THP-1細胞系增殖能力降低,早期凋亡細胞增加,BAD基因在mRNA水平上表達量增加,TP53、BCL2蛋白表達量下降,在THP-1細胞系中Caspase 3蛋白表達量減少,激活型Caspase 3蛋白表達量上升,但是二者變化在兩種細胞系中不一致。結果表明,在白血病細胞系中敲降lncRNA C20orf204-203會使細胞增殖能力降低。但其在不同細胞系作用途徑和機制可能存在差異。這一研究表明了利用shRNA文庫結合高通量測序大規模研究lncRNA在白血病細胞系中發揮作用的可行性。