cid-miR-146a在LCDV-cn感染中的差異表達及其調控作用

【摘要】：【目的】在LCDV-cn感染GCO過程中，分析cid-miR-146a的表達特性，探索cid-miR-146a的調控作用?！痉椒ā坎捎妙i環RT-PCR方法，從LCDV-cn感染的GCO細胞中獲得cid-miR-146a；在LCDV-cn感染GCO過程中，用定量PCR方法獲取cid-miR-146a的表達變化；用生物信息學方法預測和雙熒光素酶系統驗證cid-miR-146a的靶基因；轉染cid-miR-146a mimic和cid-miR-146a inhibitor對cid-miR-146a進行上調和下調，用定量PCR檢測cid-miR-146a、靶基因Flt1和LCDV-cn mcp基因在GCO中的表達?！窘Y果】LCDV-cn感染GCO后3 d-6 d細胞聚集形成“疤痕”，之后細胞逐漸脫落、裂解呈現空洞。cid-miR-146a的長度為23 bp，在LCDV-cn感染GCO過程中，cid-miR-146a的表達先上升（72 h前）后下降（72 h后）。用不同生物信息學方法共同預測到cid-miR-146a的靶基因為Flt1，在雙熒光素酶系統驗證實驗中，cid-miR-146a靶向Flt1重組載體后熒光素酶活性降低（P0.05），證實Flt1為cid-miR-146a的靶基因。對cid-miR-146a進行上調下調后，GCO中cid-miR-146a的表達差異顯著（P0.05）。在cid-miR-146a上調后，靶基因Flt1的表達顯著下降（P0.05）,LCDV-cn mcp基因的表達顯著上升（P0.05）；在cid-miR-146a下調后，靶基因Flt1的表達顯著上升（P0.05）,LCDV-cn mcp基因的表達顯著下降（P0.05）?！窘Y論】在LCDV-cn感染GCO過程中，CPE的變化與cid-miR-146a的表達變化時間點呈正相關。cid-miR-146a負調控其靶基因Flt1的表達，并對LCDV-cn的復制起著正調控作用。生物信息學方法預測說明cid-miR-146a參與調控的信號通路與免疫和腫瘤發生相關。